(一)細胞凍存

　　1. 配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細胞培養(yǎng)液;2. 取對數(shù)成長期的體細胞，除去舊細胞培養(yǎng)液，用PBS清理。

　　3. 除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長發(fā)育的體細胞消化吸收出來;4. 抽濾1000rpm，5min;5. 除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱，記數(shù)，調整凍存液中體細胞的最后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6. 將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5 ml;7. 在凍存管上標出體細胞的名字，凍存時間及作業(yè)者;8. 凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h，隨后放進-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進液氮容器內。

　　(二) 細胞復蘇

　　1. 從液氮容器中取下凍存管，立即滲入37℃溫開水中，并時常搖晃令其盡早溶化。

　　2. 從37℃水浴中取下凍存管，開啟外蓋，用塑料吸管吸出來體細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上細胞培養(yǎng)液，攪拌;3. 抽濾， 1000rpm，5min;4. 棄去上清液，添加含10%小牛血清細胞培養(yǎng)液重懸體細胞，記數(shù)，調節(jié)體細胞相對密度，打疫苗塑造瓶，37℃恒溫箱靜放塑造;5. 隔日拆換一次細胞培養(yǎng)液，再次塑造。

　　常見問題

　　1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細胞之前的塑造體細胞都能夠用以凍存，但最好是為多數(shù)成長期體細胞。在凍存前一天最好是換一次細胞培養(yǎng)液;2.將凍存管放進液氮容器或從這當中取下時，要搞好安全防護工作中，以防凍傷;3.凍存和再生最好用新配置的細胞培養(yǎng)液。

　　以上知識僅供參考希望對您有所幫助！