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造血干細(xì)胞培養(yǎng)基的適應(yīng)方法

更新時(shí)間:2017-01-11 點(diǎn)擊次數(shù):1787
     造血干細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng);而當(dāng)其在無血清、無蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。
    造血干細(xì)胞是指尚未發(fā)育成熟的細(xì)胞,是所有造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞的起源。因此是多功能干細(xì)胞,醫(yī)學(xué)上稱其為“萬用細(xì)胞”,也是人體的始祖細(xì)胞。干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細(xì)胞,是機(jī)體的起源細(xì)胞,是形成人體各種組織器官的祖宗細(xì)胞。它有兩個(gè)重要特征:其一,高度的自我更新或自我復(fù)制能力;其二,可分化成所有類型的血細(xì)胞。造血干細(xì)胞采用不對(duì)稱的分裂方式:由一個(gè)細(xì)胞分裂為兩個(gè)細(xì)胞。其中一個(gè)細(xì)胞仍然保持干細(xì)胞的一切生物特性,從而保持身體內(nèi)干細(xì)胞數(shù)量相對(duì)穩(wěn)定,這就是干細(xì)胞自我更新。而另一個(gè)則進(jìn)一步增殖分化為各類血細(xì)胞、前體細(xì)胞和成熟血細(xì)胞,釋放到外周血中,執(zhí)行各自任務(wù),直至衰老死亡,這一過程是不停地進(jìn)行著的。
    造血干細(xì)胞培養(yǎng)基的適應(yīng)方法:
    1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中。
    一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng),接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×10~3.5×10細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10~3×10細(xì)胞/ml時(shí),傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×10~4×10細(xì)胞/ml時(shí),細(xì)胞*適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10~3×10細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
    2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應(yīng)相比較,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。
    (1)以2倍正常接種密度接種生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
    (2)當(dāng)細(xì)胞密度>5×10細(xì)胞/ml時(shí),以2×10到3×10細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
    (3)以2×10到3×10細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
    (4)當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10到3×10細(xì)胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
    (5)每隔3到5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10到3×10細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。

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