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聯(lián)系我們關于細胞凍存液凍存與復蘇的操作守則
點擊次數(shù)：1477 更新時間：2017-11-07
上一篇我們講到了細胞凍存液的使用注意事項，今天呢細胞凍存液廠家小編就給大家?guī)砑毎麅龃嬉旱膬龃媾c復蘇的操作方法
細胞凍存液的凍存和復蘇操作步驟：
細胞凍存和復蘇采取“慢凍快融”的原則，慢速冷凍可使細胞內(nèi)的水份滲出細胞外，減少細胞內(nèi)形成冰晶的機會，快融以保證細胞外結晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細胞的損傷。
（一）細胞凍存液細胞凍存
配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液，4℃預冷（新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱）；
取對數(shù)生長期的細胞，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中；
離心1200rpm，6 min；
去除上清液，逐漸加入適量預冷的細胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml；
將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml；
在凍存管上標明細胞的名稱、凍存時間及操作人員姓名；
凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；到達-80℃時，則可迅速放入液氮中。
（二）細胞凍存液細胞復蘇
佩戴眼鏡和手套，從液氮中取出凍存的細胞管。
迅速放入38℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌條件下取出細胞。
1200rpm/min離心5-10min，棄去上清，加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中，次日更換一次培養(yǎng)液
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