新一代測(cè)序工作流程包括三個(gè)基本步驟：文庫(kù)制備、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。了解每一步驟的基本知識(shí)以及如何規(guī)劃您的NGS工作流程。

NGS工作流程的準(zhǔn)備工作

大多數(shù)NGS工作流程都需要在提取后進(jìn)行QC步驟。我們推薦使用紫外分光光度法來(lái)評(píng)估純度，使用熒光分析法進(jìn)行核酸定量。

NGS工作流程的第1步：文庫(kù)制備

為了節(jié)省資源，可以將多個(gè)文庫(kù)混合在一起，在同一運(yùn)行中進(jìn)行測(cè)序——該過(guò)程稱(chēng)為多重分析。接頭連接過(guò)程中，標(biāo)簽序列（或說(shuō)“條形碼”）會(huì)添加到每個(gè)文庫(kù)。這些條形碼可以在數(shù)據(jù)分析過(guò)程中區(qū)分文庫(kù)。

NGS工作流程的第2步：測(cè)序

在邊合成邊測(cè)序（SBS）過(guò)程中，化學(xué)修飾的核苷酸會(huì)通過(guò)天然的互補(bǔ)性與DNA模板鏈結(jié)合。每個(gè)核苷酸都有一個(gè)熒光標(biāo)記和一個(gè)可逆終止子，后者可以阻止下一個(gè)堿基的摻入。熒光信號(hào)可以指示出加入的核苷酸種類(lèi)，終止子被切割后，下一個(gè)堿基才可以繼續(xù)結(jié)合。

NGS工作流程的第3步：數(shù)據(jù)分析

如今，您可以使用直觀(guān)的數(shù)據(jù)分析應(yīng)用程序來(lái)分析NGS數(shù)據(jù)，無(wú)需進(jìn)行生物信息學(xué)培訓(xùn)或另外雇傭?qū)嶒?yàn)室人員。這些工具可以進(jìn)行序列比對(duì)、變異檢出、數(shù)據(jù)可視化或解讀。