神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基自然篩選法
點擊次數(shù):1250 更新時間:2015-10-28
多年的研究使神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng),體外擴增等技術(shù)日臻完善?,F(xiàn)在科學(xué)家們已克隆了人體的神經(jīng)干細胞,并將其在體外培養(yǎng),擴增。zui近,有研究又將人的神經(jīng)干細胞成功地植入了胚胎鼠腦中,這些干細胞研究在人體的應(yīng)用,使其從實驗室逐步走向了臨床,為人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供了一個全新的視角。
神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因?qū)胫委熑缜八觯┗蜣D(zhuǎn)染干細胞形成的永生細胞系不僅可以成功地整合于植入部位,而且可以穩(wěn)定地表達轉(zhuǎn)染的外源性基因,這就為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基因治療提供了一個性能*的載體。利用溫度敏感性水生神經(jīng)干細胞系建立的分泌NGF的細胞系,將其移入到被*切斷穹隆的鼠紋狀體及中隔后,移植細胞不但能良好地存活于腦組織中而且在體內(nèi)還能持續(xù)分泌 NGF,并使90%的膽堿能神經(jīng)元得到修復(fù)。
神經(jīng)干細胞是一種終身具有自我更新能力及廣泛分化潛能的細胞,它處于分化的非終末狀態(tài),可通過對稱或不對稱分裂生成新的干細胞和分化潛能逐漸變小的子細胞,zui終產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)的三種主要細胞,既神經(jīng)元細胞、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞。神經(jīng)干細胞存在于胚胎神經(jīng)系統(tǒng)及成年腦的某些特定部位,其特征性的生物學(xué)標(biāo)志為神經(jīng)巢蛋白。胚胎神經(jīng)干細胞的分裂增殖分化是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生的基礎(chǔ),成年神經(jīng)系統(tǒng)中干細胞的功能還不十分明確,一般認為它們(尤其是位于海馬區(qū)的干細胞)很可能與認知功能密切相關(guān),是神經(jīng)功能可塑性的基礎(chǔ)。具體的說就是在某些外界環(huán)境影響下,干細胞在局部生成的新神經(jīng)元可以參加記憶的形成和整合,即大腦控制行為,行為又可以反過來影響大腦的結(jié)構(gòu)。
神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用,也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細胞無法較長時間地成活,而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并增殖的神經(jīng)干細胞群體。首先將含神經(jīng)干細胞的神經(jīng)組織通過機械或酶解分散等方法制備成單細胞,然后培養(yǎng)于含有特殊營養(yǎng)添加劑和促增殖因子的不含血清的培養(yǎng)液中。非神經(jīng)干細胞在這種培養(yǎng)系統(tǒng)中由于營養(yǎng)缺陷無法較長時間地存活,而神經(jīng)干細胞則適應(yīng)該培養(yǎng)體系并在促增殖因子作用下生長增殖。因此,經(jīng)過培養(yǎng)一段時間之后,就可獲得通過這種自然篩選而增殖形成的呈神經(jīng)球狀生長的神經(jīng)干細胞群體。這種利用特殊培養(yǎng)基自然篩選神經(jīng)干細胞方法的優(yōu)點是:簡便易行,不需要特殊的儀器設(shè)備等條件,分離效率高,神經(jīng)干細胞損傷小易于成活。
神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)另外很重要的一點就是如何盡量讓其少分化或不分化,除了神經(jīng)干細胞本身的特性決定了一部分不對稱分裂的細胞必將發(fā)生自主分化外,培養(yǎng)條件對神經(jīng)干細胞的分化與否影響很大,比如在培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn),將神經(jīng)干細胞球培養(yǎng)于塑料器皿,其黏附于器皿表面并發(fā)生分化的可能要比培養(yǎng)于玻璃器皿的高很多。另外,某些底物如多聚賴氨酸或多聚尿氨酸、作為細胞外基質(zhì)的的層黏臉蛋白、膠原等都能在無特殊誘導(dǎo)劑存在的情況下,促進神經(jīng)干細胞的貼壁而分化。神經(jīng)干細胞在體外分化的形態(tài)表現(xiàn)為由圓形變成帶有明顯突起、形態(tài)各異的神經(jīng)細胞,懸浮的神經(jīng)球出現(xiàn)貼壁呈圓盤狀,形態(tài)各異的細胞向周圍呈放射狀長出并遷移,甚至全部細胞均分化平鋪于器皿上生長。