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培養(yǎng)基生產(chǎn)和使用常見問題
點擊次數(shù)：2042 更新時間：2016-06-27
培養(yǎng)基生產(chǎn)和使用常見問題：
1. 低血清培養(yǎng)基能用肉眼判斷其pH值嗎？
答：低血清培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗來判定pH值，建議使用pH計進(jìn)行測定。
2. 低血清培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)是什么？
答：平衡鹽一般是由無機(jī)鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統(tǒng)、Earle′s系統(tǒng)、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統(tǒng)等。199系列培養(yǎng)基、MEM系列培養(yǎng)基均有Hanks′系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle′s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。但是有些培養(yǎng)基均不是以上常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI 1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。
3. 谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的配制方法是什么？
答：以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制為例：稱取L-谷氨酰胺2.92g，加注射用水100ml，充分?jǐn)嚢杌靹颉Ｓ?.2μm濾膜正壓過濾除菌。溶液應(yīng)在4℃下避光保存，2周內(nèi)使用。
以7.5% NaHCO3的配制為例：稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾除菌。
4. 什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？
答：酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生影響，可以通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長，當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。 酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分，很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。
5. 放置在冰箱中的培養(yǎng)基顏色會發(fā)生變化，為什么？
答：培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)CO2 會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿后再用于細(xì)胞培養(yǎng)將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。培養(yǎng)基偏堿時，可以通入無菌過濾的CO2，以調(diào)整pH值。
6. 無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？
答：當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。因為血清中的蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。而在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活。
