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TAKARA pMD 18-T Vector Cloning Kit
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產品型號:
6011
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產品特點:
產品名稱:TAKARA pMD 18-T Vector Cloning Kit 產品貨號:6011
  6011TAKARA pMD 18-T Vector Cloning Kit的詳細資料:

產品名稱:pMD 18-T Vector Cloning Kit  PMD18-T vector  載體

產品貨號:6011

產品說明:

 

制品內容

pMD 18-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支

Control Insert (50 ng/μl) 10 μl × 1 支

Solution I* 75 μl × 2 支

   

* 使用時請于冰中融解。  

 

■ 制品說明

pMD 18-T Vector是一種高效克隆PCR產物 (TA Cloning) 的載體。本載體由pUC18載體改建而成,在pUC18載體的多克隆位點處的Xba I 和Sal I 識別位點之間插入了EcoR V 識別位點,用EcoR V 進行酶切反應后,再在兩側的3′端添加 “T” 而成。因大部分耐熱性DNA聚合酶進行PCR反應時都有在PCR 產物的3′末端添加一個 “A” 的特性,所以使用本制品可以大大提高PCR產物的連接、克隆效率。

由于本載體以pUC18載體為基礎構建而成,所以它具有同pUC18載體相同的功能。此外,本制品中的高效連接液Solution I 可以在短時間內 (約30分鐘) 完成連接反應,其連接液可以直接用于細菌轉化,大大方便了實驗操作。本制品中的Control Insert (500 bp) 還可以用于Control反應。

 

■ 保存

-20℃。

 

■ 純度

Control Insert經克隆后的白色菌落中,有90%以上含有Insert DNAp段。

 

■ 用途

1. 進行TA克隆,克隆PCR產物。

2. 對克隆后的PCR產物使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers進行DNA測序。

 

■ pMD 18-T Vector的結構

 

 

■ 注意事項

1. Solution I 請于冰中融解。

2. 克隆時使用的Insert DNAp段 (PCR產物) 建議進行切膠回收純化,否則PCR產物中的短片段DNA (甚至是電泳也無法確認的非特異性小片段)、殘存引物等雜質都會影響TA克隆效率。

3. 按照本實驗操作進行連接后,直接進行轉化時的連接液不要超過20 μl。當要轉化的DNA量較大或準備進行電轉化時,需對連接液進行乙醇沉淀,純化DNA后再進行轉化。進行乙醇沉淀時使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。

4. 連接反應請在25℃以下進行,溫度升高 (>26℃) 較難形成環(huán)狀DNA。連接效率偏低時,可適當延長連接反應時間至數小時。

5. 本制品來源于pUC18載體,因此,適合pUC18載體的感受態(tài)細胞都可以使用,如:JM109等。

 

產品名稱:TAKARA pMD 18-T Vector Cloning Kit        產品貨號:6011

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產品名稱:pMD 18-T Vector Cloning Kit  PMD18-T vector  載體

產品貨號:6011

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