產(chǎn)品名稱：pMD 18-T Vector Cloning Kit  PMD18-T vector  載體

產(chǎn)品貨號：6011

產(chǎn)品說明：

制品內(nèi)容

pMD 18-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支

Control Insert (50 ng/μl) 10 μl × 1 支

Solution I* 75 μl × 2 支

* 使用時請于冰中融解。  

■ 制品說明

pMD 18-T Vector是一種高效克隆PCR產(chǎn)物 (TA Cloning) 的載體。本載體由pUC18載體改建而成，在pUC18載體的多克隆位點處的Xba I 和Sal I 識別位點之間插入了EcoR V 識別位點，用EcoR V 進行酶切反應后，再在兩側(cè)的3′端添加 “T” 而成。因大部分耐熱性DNA聚合酶進行PCR反應時都有在PCR 產(chǎn)物的3′末端添加一個 “A” 的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR產(chǎn)物的連接、克隆效率。

由于本載體以pUC18載體為基礎構建而成，所以它具有同pUC18載體相同的功能。此外，本制品中的高效連接液Solution I 可以在短時間內(nèi) (約30分鐘) 完成連接反應，其連接液可以直接用于細菌轉(zhuǎn)化，大大方便了實驗操作。本制品中的Control Insert (500 bp) 還可以用于Control反應。

■ 保存

-20℃。

■ 純度

Control Insert經(jīng)克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNAp段。

■ 用途

1. 進行TA克隆，克隆PCR產(chǎn)物。

2. 對克隆后的PCR產(chǎn)物使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers進行DNA測序。

■ pMD 18-T Vector的結構

■ 注意事項

1. Solution I 請于冰中融解。

2. 克隆時使用的Insert DNAp段 (PCR產(chǎn)物) 建議進行切膠回收純化，否則PCR產(chǎn)物中的短片段DNA (甚至是電泳也無法確認的非特異性小片段)、殘存引物等雜質(zhì)都會影響TA克隆效率。

3. 按照本實驗操作進行連接后，直接進行轉(zhuǎn)化時的連接液不要超過20 μl。當要轉(zhuǎn)化的DNA量較大或準備進行電轉(zhuǎn)化時，需對連接液進行乙醇沉淀，純化DNA后再進行轉(zhuǎn)化。進行乙醇沉淀時使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。

4. 連接反應請在25℃以下進行，溫度升高 (>26℃) 較難形成環(huán)狀DNA。連接效率偏低時，可適當延長連接反應時間至數(shù)小時。

5. 本制品來源于pUC18載體，因此，適合pUC18載體的感受態(tài)細胞都可以使用，如：JM109等。

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